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              如何使用抗-PEG瓊脂糖親和純化mPEG-BSA

              來源:作者:人氣:-發表時間:2020-03-20 16:11:00【

              使用9B5抗-聚乙二醇瓊脂糖親和純化20kDa的mPEG-BSA

               
              產品描述:
              9B5抗-聚乙二醇瓊脂糖(貨號9B5-AG) 是由單克隆抗體9B5-625-7在FC區與瓊脂糖發生不可逆偶聯制備得到。每毫升固定瓊脂糖大約偶聯0.6 毫克抗體。
               
              方法: 
              1. 9B5 抗-聚乙二醇瓊脂糖 (3 ml) 和 150 mM 氯化鈉, 10 mM 磷酸鈉, 0.1% 疊氮鈉 pH 7.2 (磷酸緩沖溶液PBS) 在內徑1 cm的柱子內混合均勻直至平衡。
              2. 1.0 毫升含有0.125毫克90% 純的20 kDa甲氧基聚乙二醇-牛血清白蛋白和0.5毫克人肌紅蛋白混合物在磷酸緩沖溶液PBS 中加入柱子中。
              3. 柱子用每次2毫升PBS沖洗,共4次。
              4. 用每次1毫升含25%乙二醇和1%聚乙二醇8000的50%磷酸緩沖液洗脫,共9次。
              5. 組分使用聚丙烯酰胺凝膠電泳測定在12.5% Laemmli 迷你凝膠上跑膠分析。
               
              結果:如下圖所示, 20 kDa甲氧基聚乙二醇-牛血清白蛋白結合 9B5抗-聚乙二醇瓊脂糖, 對照過柱的未結合聚乙二醇的蛋白質,包括牛血清白蛋白和人肌紅蛋白。 純20 kDa 甲氧基聚乙二醇-牛血清白蛋白使用含25%乙二醇和1%聚乙二醇8000的緩沖溶液進行洗脫.
              抗-聚乙二醇瓊脂糖親和純化20kDa的mPEG-BSA考馬斯藍染色SDS-PAGE電泳
               圖1. 考馬斯藍染色SDS-PAGE凝膠電泳顯示1道為柱載,經9B5抗-聚乙二醇親和純化過的20kda的使用含25%乙二醇和1%聚乙二醇8000的緩沖溶液進行洗脫。2-6道,為過流部分和洗滌部分。7-9道,為洗脫部分。
               
              注意:
              1. 在與抗-聚乙二醇瓊脂糖進行結合前,應確保樣品不含未結合聚乙二醇。
              2. 聚乙二醇集合蛋白質可以使用25%乙二醇而無需聚乙二醇8000進行洗脫,但需要用到更多的緩沖溶液。乙二醇隨后很容易通過透析除去。
              3. 使用含25%乙二醇的磷酸緩沖液(約20倍柱體積)沖洗,然后在PBS中再次平衡,很容易再生9B5抗-聚乙二醇瓊脂糖。
               

               

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